ชุดทดสอบ Phenylethanolamine A ELISA สำหรับเซรั่มไข่นมในปัสสาวะ 96 Wells/Kit

ชุดทดสอบ Phenylethanolamine A ELISA สำหรับเซรั่มไข่นมในปัสสาวะ 96 Wells / Kit

 

1. หลักการ

ชุดทดสอบนี้ใช้เอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์ของคู่แข่งในการตรวจหาฟีนิลเอทาโนลามีน A ในตัวอย่างแอนติเจนคอนจูเกตถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กฟีนิลเอธานอลามีน A ในตัวอย่างและแอนติเจนของคัปปลิ้งที่เคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กจะแข่งขันกันเพื่อหาแอนติบอดีต้านฟีนิลเอทาลามีน Aหลังจากการเติมคอนจูเกตของเอ็นไซม์แล้ว ซับสเตรต TMB จะถูกเพิ่มสำหรับการแต่งสีค่าความหนาแน่นเชิงแสง (OD) ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับความเข้มข้นของฟีนิลเอทาโนลามีน A ในตัวอย่างค่าจะถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานและจะได้ความเข้มข้นของฟีนิลเอทาโนลามีน A ในเวลาต่อมา

 

2. ข้อกำหนดทางเทคนิค

ความไว: 0.1 ppb
อุณหภูมิตู้ฟักไข่: 25℃
เวลาฟักไข่: 30นาที～15นาที

ขีดจำกัดการตรวจจับ
เนื้อเยื่อ 0.2 ppb
ฟีด 0.5 ppb

ปฏิกิริยาข้าม:
ฟีนิลเอทาโนลามีน เอ 100%
แรคโทพามีน <1%
ซัลบูทามอล <1%
เคลนบิวเทอรอล <1%
อัตราการฟื้นตัว
เนื้อเยื่อฟีด 85±25%

 

3. ส่วนประกอบ

 

1	แถบไมโครหลุม	12 แถบ 8 ที่ถอดออกได้ แต่ละบ่อ
2	6× สารละลายมาตรฐาน (แต่ละ 1 มล.)	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	คอนจูเกตเอนไซม์	7ml	หมวกแดง
4	โซลูชันการทำงานของแอนติบอดี	7ml	หมวกสีน้ำเงิน
5	พื้นผิว A	7ml	หมวกสีขาว
6	พื้นผิวB	7ml	หมวกสีดำ
7	หยุดการแก้ปัญหา	7ml	หมวกสีเหลือง
8	20× บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น	40มล.	หมวกสีขาว
9	น้ำยาละลายซ้ำเข้มข้น 2 เท่า	50ml	หมวกใส

 

4. วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้

1) อุปกรณ์: เครื่องอ่านไมโครเพลท, เครื่องพิมพ์, เครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน, อุปกรณ์ทำแห้งด้วยไนโตรเจน, ออสซิลเลเตอร์, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปตวัด, เครื่องชั่ง (ความไวซึ่งกันและกัน 0.01 กรัม), ตู้อบ
2) Micropipettors: ช่องสัญญาณเดียว 20-200 µL และ 100-1000 µL และหลายช่องสัญญาณ 30-300 µL;
3) รีเอเจนต์: Ethyl acetate, N-hexane, Glacial acetic acid

 

5. ตัวอย่างก่อนการรักษา

คำแนะนำ (ต้องจัดการประเด็นต่อไปนี้ก่อนการรักษา)
1) เฉพาะทิปแบบใช้แล้วทิ้งเท่านั้นที่สามารถใช้ได้สำหรับการทดลอง และต้องเปลี่ยนทิปเมื่อใช้สำหรับการดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน
2) ก่อนการทดลอง อุปกรณ์ทดลองแต่ละชิ้นจะต้องสะอาดและควรทำความสะอาดใหม่หากจำเป็น เพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งปนเปื้อนที่รบกวนผลการทดลอง

การเตรียมสารละลายก่อนการบำบัดตัวอย่าง:
1) สารละลายสำหรับการสกัดตัวอย่าง: ใช้เอทิลอะซิเตท 99 มล. เติมกรดอะซิติกน้ำแข็ง 1 มล. แล้วผสมให้เข้ากัน
2) สารละลายละลายตัวอย่างซ้ำ: สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 2× เจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:1 (สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 1 มล. + น้ำปราศจากไอออน 1 มล.) ที่ใช้สำหรับการละลายตัวอย่างซ้ำ

การเตรียมตัวอย่าง
5.1 ฟีด
1. บดตัวอย่าง นำ 1.0±0.05g ลงในหลอดปั่นแยกขนาด 50 มล.
2. เติมสารละลายสำหรับสกัดตัวอย่าง 10 มล. เขย่าด้วยออสซิลเลเตอร์เป็นเวลา 3 นาที
3. ปั่นแยกที่ 4000 รอบ/นาที ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที
4. ใช้ supernatant 2 มล. เป่าให้แห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่ 50-60 ℃;
5. เติม N-hexane 1 มล. จากนั้นเติมสารละลายตัวอย่างซ้ำ 1 มล. เขย่า 30 วินาที
6. ปั่นแยกที่ 4000 รอบ/นาที ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที นำเฟสอินทรีย์ชั้นบนออก
7. ใช้เลเยอร์ล่าง 20 ไมโครลิตรสำหรับการวิเคราะห์
เท่าของการเจือจางตัวอย่าง:5
(เนื่องจากมีการรบกวนของตัวอย่าง แนะนำให้ 2PPB เป็นค่า CUT OFF ตัวอย่าง )

5.2 เนื้อเยื่อ
1. นำตัวอย่างเนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกัน 2.0±0.05g ลงในหลอดปั่นแยกขนาด 50 มล.
2.เติมสารละลายสำหรับสกัดตัวอย่าง 8 มล. เขย่าด้วยออสซิลเลเตอร์เป็นเวลา 2 นาที
3.ปั่นแยกที่ 4000 รอบ/นาที ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที
4. ใช้ supernatant 2 มล. เป่าให้แห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่ 50-60 ℃
5. เติม N-hexane 1 มล. จากนั้นเติมสารละลายตัวอย่าง 1 มล. เขย่าเป็นเวลา 30 วินาที
6.ปั่นแยกที่ 4000 รอบ/นาที ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที นำเฟสอินทรีย์ชั้นบนออก
7. ใช้เลเยอร์ล่าง 20 ไมโครลิตรเพื่อการวิเคราะห์
เท่าของการเจือจางตัวอย่าง:2
(เนื่องจากมีการรบกวนของตัวอย่าง แนะนำให้ 1PPB เป็นค่า CUT OFF ตัวอย่าง )

 

6. ขั้นตอน ELISA

6.1คำแนะนำ
1. นำรีเอเจนต์และแถบไมโครหลุมทั้งหมดไปที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ก่อนใช้งาน
2. คืนรีเอเจนต์ทั้งหมดไปที่ 2-8 ℃ ทันทีหลังการใช้งาน
3. ความสามารถในการทำซ้ำของการวิเคราะห์ ELISA ในระดับสูง ขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอของการล้างจานการทำงานที่ถูกต้องของการล้างจานเป็นประเด็นสำคัญในกระบวนการของ ELISA
4. สำหรับการฟักที่อุณหภูมิคงที่ ตัวอย่างและรีเอเจนต์ทั้งหมดต้องหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสง และไมโครเพลทแต่ละแผ่นควรปิดผนึกด้วยเมมเบรนฝาครอบ

6.2ขั้นตอนการปฏิบัติงาน
1. นำชุดทดสอบไปไว้ในอุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที โปรดทราบว่าจะต้องเขย่าน้ำยาแต่ละชนิดให้ผสมกันอย่างสม่ำเสมอก่อนใช้งาน
2. การเตรียมสารละลาย: เจือจาง 40 มล. 20× น้ำยาล้างบัฟเฟอร์เข้มข้นด้วยน้ำปราศจากไอออน ที่ 1:19 (บัฟเฟอร์สำหรับซักล้างเข้มข้น 20 เท่า 1 ส่วน + น้ำปราศจากไอออน 19 ส่วน) หรือเตรียมตามปริมาณที่ต้องการ
3. ใส่แถบหลุมขนาดเล็กที่ต้องการลงในโครงเพลตปิดผนึกไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้อีกครั้ง เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง
4. การกำหนดหมายเลข: กำหนดหมายเลขหลุมขนาดเล็กตามตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานแต่ละตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานควรดำเนินการซ้ำกันบันทึกตำแหน่งของพวกเขา
5. เพิ่ม 50 µL ของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐานลงในหลุมที่ซ้ำกันแยกกันเติมคอนจูเกตของเอนไซม์ 50 ไมโครลิตร จากนั้นเติมสารละลายทำงานของแอนติบอดี 50 ไมโครลิตรในแต่ละหลุม ปิดไมโครเพลทด้วยเมมเบรนฝาครอบ และบ่มที่อุณหภูมิ 25 ℃ เป็นเวลา 30 นาที
6. เทของเหลวออกจาก microwell ผึ่งให้แห้งบนกระดาษดูดซับเติมน้ำปราศจากไอออน 250 ไมโครลิตร/หลุม ล้าง 15-30 วินาที จากนั้นนำกระดาษซับออกแล้วผึ่งให้แห้ง ทำซ้ำ 4-5 ครั้ง
7. การลงสี: เพิ่ม 50 µL ของสารละลาย A ของซับสเตรต A, 50 µL ของสารละลาย B ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยตนเอง และบ่มที่ 25 ℃ เป็นเวลา 15 นาทีที่มืดสำหรับสี
8. การกำหนด: เติม 50 µL ของสารละลายสต็อปลงในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ 450 นาโนเมตร เพื่อกำหนดค่า OD ของทุกหลุม(แนะนำให้อ่านค่า OD ที่ความยาวคลื่นคู่ 450/630 nm ภายใน 5 นาที)

 

7. การตัดสินผล

มีสองวิธีในการตัดสินผลลัพธ์อันแรกคือการตัดสินคร่าวๆ ในขณะที่อันที่สองคือการกำหนดเชิงปริมาณโปรดทราบว่าค่า OD ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ Phenylethanolamine A ในตัวอย่าง

7.1 การกำหนดคุณภาพ
ช่วงความเข้มข้น (ng/mL) สามารถหาได้จากรูปแบบการเปรียบเทียบค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างกับค่าของสารละลายมาตรฐานสมมติว่าค่า OD ของ sampleⅠ คือ 0.3 และของ sampleⅡ คือ 1.0 ค่า OD ของโซลูชันมาตรฐานคือ 2.243 สำหรับ 0ppb, 1.866 สำหรับ 0.1ppb, 1.415 สำหรับ 0.3ppb, 0.864 สำหรับ 0.9ppb, 0.413 สำหรับ 2.7ppb , 0.155 สำหรับ 8.1ppb ดังนั้น ช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างⅠ คือ 0.3 ถึง 0.9ppb และของตัวอย่างⅡ คือ 2.7ppb ถึง 8.1ppb

7.2 การกำหนดเชิงปริมาณ
ค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงที่ได้รับสำหรับค่า OD เฉลี่ย (B) ของตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานหารด้วยค่า OD (B0) ของสารละลายมาตรฐานแรก (0 มาตรฐาน) และคูณด้วย 100% ในเวลาต่อมา นั่นคือ

 

เปอร์เซ็นต์ของค่าการดูดกลืนแสง =	บี	×100%
	B0

 

B—ค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน
B0—ค่า OD เฉลี่ยของสารละลายมาตรฐาน 0 ng/mL
วาดเส้นโค้งมาตรฐานด้วยเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนของสารละลายมาตรฐานและค่าเซมิลอการิทึมของสารละลายมาตรฐาน Phenylethanolamine A (ng/mL) เป็นแกน Y และ X ตามลำดับอ่านความเข้มข้นที่สอดคล้องกันของตัวอย่างจากกราฟมาตรฐานโดยรวมเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนเข้าไปในกราฟมาตรฐานค่าที่เป็นผลลัพธ์จะถูกคูณในเวลาต่อมาด้วยการพับของการเจือจางที่สอดคล้องกัน ในที่สุดก็ได้ความเข้มข้นที่แท้จริงของฟีนิลเอธานอลามีน A ในตัวอย่าง
การใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ระดับมืออาชีพของชุดอุปกรณ์นี้จะสะดวกยิ่งขึ้นสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนมากที่แม่นยำและรวดเร็ว(โปรดติดต่อเราสำหรับซอฟต์แวร์นี้)

8. ข้อควรระวัง

1. อุณหภูมิห้องต่ำกว่า 25 ℃ หรืออุณหภูมิของรีเอเจนต์และตัวอย่างที่ไม่คืนสู่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) จะทำให้ค่า OD มาตรฐานต่ำลง
2. ความแห้งของไมโครเพลทในกระบวนการซักจะมาพร้อมกับสถานการณ์ต่างๆ รวมถึงเส้นโค้งมาตรฐานที่ไม่เป็นเชิงเส้นและการทำซ้ำที่ไม่ต้องการดังนั้นให้ทำตามขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากล้าง
3. ผสมอย่างสม่ำเสมอ ล้างจานอย่างสมบูรณ์ ความสามารถในการทำซ้ำของการวิเคราะห์ ELISA ในระดับมาก ขึ้นอยู่กับความสอดคล้องของการล้างจาน
4. สารละลายสต็อปคือสารละลายกรดซัลฟิวริก 2 M หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง
5. อย่าใช้ชุดอุปกรณ์เกินวันหมดอายุการใช้รีเอเจนต์เจือจางหรือเจือปนจากชุดอุปกรณ์จะนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในความไวและค่า OD ที่ตรวจจับได้ห้ามเปลี่ยนรีเอเจนต์จากชุดหมายเลขล็อตที่แตกต่างกันเพื่อใช้
6. ใส่ไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ลงในถุงปิดผนึกอัตโนมัติเพื่อปิดผนึกใหม่สารมาตรฐานและสารเติมแต่งสีที่ไม่มีสีมีความไวต่อแสง ดังนั้นจึงไม่สามารถสัมผัสกับแสงได้โดยตรง
7. ทิ้งสารละลายแต่งสีด้วยสีใดๆ ที่บ่งบอกถึงความเสื่อมของสารละลายนี้ค่าการตรวจจับของโซลูตินมาตรฐาน 0 ที่น้อยกว่า 0.5 (A450 นาโนเมตร< 0.5 ) บ่งชี้ถึงความเสื่อม
8. อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25 ℃ และอุณหภูมิสูงหรือต่ำเกินไปจะส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความไวในการตรวจจับและค่า OD

9. วันที่จัดเก็บและวันหมดอายุ

การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง
วันหมดอายุ: 12 เดือน;วันที่ผลิตอยู่บนกล่อง
หมายเหตุ: หากแพ็คเกจสูญญากาศของไมโครเพลทเกิดการรั่วซึม ยังคงใช้ได้อยู่ ไม่ส่งผลต่อผลการทดสอบ โปรดผ่อนคลายในการใช้งาน

 

 

 

 

 

Q1: เมื่อไหร่จะถูกจัดส่ง?
A1: เราจะจัดส่งสินค้าให้คุณโดยเร็วที่สุดภายใน 7 วันทำการหลังจากได้รับการชำระเงิน(กรณีปัจจัยภายนอก เช่น โรคระบาด การจัดส่งอาจล่าช้า)

 

Q2: รองรับ OEM / ODM หรือไม่?
A2: รองรับได้ แต่ปริมาณเฉพาะต้องมีมากกว่า 100,000 ชิ้น ซึ่งสะดวกสำหรับผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง

 

Q3: โรงงานของคุณมีการควบคุมคุณภาพอย่างไร?
A3: เราได้รับการรับรองระดับประเทศ ISO9001 และ ISO13485กระบวนการผลิตของเราสอดคล้องกับขั้นตอนมาตรฐานเพื่อให้มั่นใจในคุณภาพของผลิตภัณฑ์ที่เหมาะสมที่สุด

 

Q4: จะให้บริการหลังการขายอย่างไร?
A4: เราให้บริการหลังการขายทางเทคนิคออนไลน์อย่างมืออาชีพเราสามารถให้คำแนะนำแบบตัวต่อตัวผ่านวิดีโอ โทรศัพท์ ฯลฯ

 

Q5: วิธีการชำระเงินคืออะไร?
A5: เราได้รับการชำระเงินโดย T/T

 

Q6: วิธีการจัดส่ง?
A6: เลือกวิธีการจัดส่งที่ดีที่สุดสำหรับคุณโดยรับใบเสนอราคาจากผู้ให้บริการที่ร่วมมือกันหลายรายของเรา และจัดส่งตามความต้องการของคุณ