Nitrofuran SEM ELISA ชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหารสำหรับความไวของนม 0.02ppb 96Wells / Kit

Nitrofuran SEM ELISA ชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหารสำหรับความไวของนม 0.02ppb 96Wells/Kit

 

1. หลักการชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหาร Nitrofuran SEM ELISA

 

ชุดทดสอบนี้อิงตามการทดสอบเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์สำหรับการตรวจหา Nitrofuran (SEM) ในตัวอย่างแอนติเจนของคัปปลิ้งถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กNitrofuran (SEM) ในตัวอย่างและแอนติเจนของคัปปลิ้งที่เคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กจะแข่งขันกันเพื่อชิงแอนติบอดีต้าน SEMหลังจากการเติมคอนจูเกตของเอ็นไซม์แล้ว ซับสเตรต TMB จะถูกเพิ่มสำหรับการแต่งสีค่าความหนาแน่นเชิงแสง (OD) ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ SEM ในนั้นค่านี้ถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานและจะได้ความเข้มข้นของ SEM ในภายหลัง

 

2. ข้อกำหนดทางเทคนิค

 

ความไว: 0.02ppb

อุณหภูมิฟักตัว: 25 ℃

ระยะฟักตัว: 30นาที～15นาที

ขีดจำกัดการตรวจจับ เนื้อเยื่อ ไข่ น้ำผึ้ง: 0.1ppb

อัตราการเกิดปฏิกิริยาข้าม

เอสอีเอ็ม 100%

AMOZ < 0.1%

AOZ < 0.1%

AHD < 0.1%

อัตราการฟื้นตัว

เนื้อเยื่อ 75±25%

น้ำผึ้ง 70±20%

ไข่ 95±25%

 

3. ส่วนประกอบชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหาร Nitrofuran SEM ELISA

 

1	แถบไมโครหลุม	12 แถบ 8 ที่ถอดออกได้ แต่ละบ่อ
2	6× สารละลายมาตรฐาน (แต่ละ 1 มล.)	0ppb	0.02ppb
		0.06ppb	0.18ppb
		0.54ppb	1.62ppb
3	คอนจูเกตเอนไซม์	7ml	หมวกแดง
4	โซลูชันการทำงานของแอนติบอดี	7ml	หมวกสีน้ำเงิน
5	พื้นผิว A	7ml	หมวกสีขาว
6	พื้นผิวB	7ml	หมวกสีดำ
7	หยุดการแก้ปัญหา	7ml	หมวกสีเหลือง
8	20× บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น	40มล.	หมวกสีขาว
9	น้ำยาละลายซ้ำเข้มข้น 2 เท่า	50ml	หมวกใส
10	2-ไนโตรเบนซาลดีไฮด์ (C7H5NO3)	10มล.	หมวกสีดำ

 

4. วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้

 

1) อุปกรณ์: เครื่องอ่านไมโครเพลท, เครื่องพิมพ์, เครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน, อุปกรณ์ทำแห้งไนโตรเจน, กระแสน้ำวน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปตวัด, สมดุล (ความไวซึ่งกันและกัน 0.01 กรัม), ตู้อบ, อ่างน้ำ;

2) Micropipettors: ช่องสัญญาณเดียว 20-200µL, 100-1000µL และหลายช่องสัญญาณ 30～300µl;

3) รีเอเจนต์: NaOH, เอทิลอะซิเตท, n-Hexane, HCI (ประมาณ 36.5%), K2HPO4·3H2O

 

5. ตัวอย่างก่อนการรักษา

 

คำแนะนำ

ต้องจัดการประเด็นต่อไปนี้ก่อนการบำบัดตัวอย่างชนิดใดๆ ก่อน:

1) เฉพาะทิปแบบใช้แล้วทิ้งเท่านั้นที่สามารถใช้ได้สำหรับการทดลอง และต้องเปลี่ยนทิปเมื่อใช้สำหรับการดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน

2) ก่อนการทดลอง อุปกรณ์ทดลองแต่ละชิ้นต้องสะอาดและควรทำความสะอาดใหม่หากจำเป็น เพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งปนเปื้อนที่รบกวนผลการทดลอง

การเตรียมสารละลายก่อนการบำบัดตัวอย่าง:

1) 0.1 M K2HPO4: ละลาย 11.4 g K2HPO4·3H2O ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 500 มล.

2) 1 M HCl: ละลาย HCI 8.6 มล. (ประมาณ 36.5%) ในน้ำปราศจากไอออนถึง 100 มล.

3) 1 M NaOH: ละลาย 4g NaOH ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 100 มล.

4) สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 2× ถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:1 (สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 1 มล. + น้ำปราศจากไอออน 1 มล.) ที่ใช้สำหรับการละลายตัวอย่างซ้ำ

 

5.1 การเตรียมตัวอย่าง

ก) เนื้อเยื่อ ไข่

1) ชั่งน้ำหนักตัวอย่างที่เป็นเนื้อเดียวกัน 1± 0.05 กรัม เติมน้ำกลั่น 4 มล., HCI 0.5 มล. 1 M และ 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในหลอดแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 ℃ ข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56℃ ด้วยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิฟิเคชันหรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3 มล. ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80 ℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่ และระเหยจนแห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายละลายซ้ำที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000 r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70 ℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

เท่าของการเจือจางของตัวอย่าง: 2

ข) น้ำผึ้ง

1) ชั่งน้ำหนัก 2± 0.05g ของตัวอย่างที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (น้ำผึ้ง) เติมน้ำกลั่น 4 มล., 0.5 มล. 1 M HCI และ 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 ℃ ข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56℃ ด้วยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิไฟเออร์หรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3ml ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่และระเหยให้แห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่อุณหภูมิ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายเจือจางที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70 ℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

เท่าของการเจือจางของตัวอย่าง: 1

 

6. ขั้นตอน ELISA

 

6.1 คำแนะนำ

1) นำรีเอเจนต์และแถบไมโครหลุมทั้งหมดไปที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ก่อนใช้งาน

2) คืนรีเอเจนต์ทั้งหมดไปที่ 2-8 ℃ ทันทีหลังการใช้งาน

3) ความสามารถในการทำซ้ำของการวิเคราะห์ ELISA ในระดับสูง ขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอของการล้างจานการทำงานที่ถูกต้องของการล้างจานเป็นประเด็นสำคัญในกระบวนการของ ELISA;

4) สำหรับการฟักที่อุณหภูมิคงที่ ตัวอย่างและรีเอเจนต์ทั้งหมดต้องหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสง และไมโครเพลทแต่ละแผ่นควรปิดผนึกด้วยเมมเบรนฝาครอบ

 

6.2 ขั้นตอนการปฏิบัติงาน

1) วางชุดอุปกรณ์ไว้ที่อุณหภูมิห้อง (20-25°C) เป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที โปรดทราบว่าแต่ละรีเอเจนต์ต้องเขย่าและผสมให้เข้ากันดีก่อนใช้งาน และใส่แถบไมโครเวลล์ที่จำเป็นลงในโครงเพลทไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ควรปิดผนึกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ห้ามแช่แข็ง

2) การเตรียมสารละลาย: นำบัฟเฟอร์สำหรับล้างเข้มข้น 20× ขนาด 40 มล. และเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:19 (บัฟเฟอร์สำหรับล้างเข้มข้น 20 เท่า 1 ส่วน + น้ำปราศจากไอออน 19 ส่วน)หรือเตรียมตามความจำเป็น

3) การกำหนดหมายเลข: กำหนดหมายเลข microwells ตามตัวอย่างและโซลูชันมาตรฐานแต่ละตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานควรทำซ้ำ และควรบันทึกตำแหน่งของตัวอย่างเหล่านั้น

4) เพิ่มตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน 50µL ลงในหลุมที่ซ้ำกันเติมคอนจูเกตของเอนไซม์ 50ul ลงในแต่ละหลุม จากนั้นเติมสารละลายการทำงานของแอนติบอดี 50µL แล้วเขย่าจานเพื่อผสมเบาๆปิดไมโครเพลทด้วยฟิล์มคลุมแล้วฟักที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที

5) เทของเหลวลงใน microwells เช็ดให้แห้งบนกระดาษซับน้ำ เติมบัฟเฟอร์การซัก 250 ไมโครลิตร/หลุม เพื่อล้างแผ่น microwell เป็นเวลา 15-30 วินาที จากนั้นนำออกและซับให้แห้งด้วยกระดาษดูดซับ ทำซ้ำ 4-5 ครั้ง(หากมีฟองอากาศหลังจากแตะแล้ว ให้ตัดด้วยปลายที่สะอาด)

6) การพัฒนาสี: เพิ่ม 50 µL ของ Substrate A และ 50 µL ของ Substrate B ในแต่ละหลุมเขย่าจานด้วยมือเพื่อผสมเบา ๆ และฟักที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีในที่มืดเพื่อพัฒนาสี

7) การทดสอบ: เพิ่มสารละลายสต็อป 50 ไมโครลิตรในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องอ่านไมโครเพลทเป็น 450 นาโนเมตรเพื่อกำหนดค่า OD ของแต่ละหลุม(ขอแนะนำให้อ่านค่า OD ที่ความยาวคลื่นคู่ 450/630nm ภายใน 5 นาที)

 

7. การตัดสินผล

 

มีสองวิธีในการตัดสินผลลัพธ์: วิธีแรกคือการตัดสินคร่าวๆ ในขณะที่วิธีที่สองคือการตัดสินเชิงปริมาณโปรดทราบว่าค่า OD ของกลุ่มตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับเนื้อหาของ SEM

7.1 การกำหนดคุณภาพ

ช่วงความเข้มข้น (ng/mL) สามารถหาได้จากการเปรียบเทียบค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างกับค่าของสารละลายมาตรฐานสมมติว่าค่า OD ของ sampleⅠ คือ 0.3 และของ sampleⅡ คือ 1.0ppb ค่า OD ของโซลูชันมาตรฐานคือ: 2.243 สำหรับ 0ppb, 1.816 สำหรับ 0.02ppb, 1.415 สำหรับ 0.06ppb, 0.74 สำหรับ 0.18ppb, 0.313 สำหรับ 0.54 ppb, 0.155 สำหรับ 1.62ppb ดังนั้นช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างⅠ คือ 0.54 ถึง 1.62ppb และของตัวอย่างⅡ คือ 0.06 ถึง 0.18ppb

7.2 การกำหนดเชิงปริมาณ

หาค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงสำหรับค่า OD เฉลี่ย (B) ของตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานหารด้วยค่า OD (B0) ของสารละลายมาตรฐานแรก (0 มาตรฐาน) และคูณด้วย 100% ในเวลาต่อมา นั่นคือ ,

เปอร์เซ็นต์ของค่าการดูดกลืนแสง =	บี	×100%
	B0

B—ค่า OD เฉลี่ย (หลุมคู่) ของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน

B0—ค่า OD เฉลี่ยของสารละลายมาตรฐาน 0ng/mL

วาดเส้นโค้งมาตรฐานด้วยเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนของสารละลายมาตรฐานและค่าเซมิลอการิทึมของสารละลายมาตรฐาน SEM (ng/mL) เป็นแกน Y และ X ตามลำดับอ่านความเข้มข้นที่สอดคล้องกันของตัวอย่างจากกราฟมาตรฐานโดยรวมเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนเข้าไปในกราฟมาตรฐานค่าที่เป็นผลลัพธ์จะถูกคูณด้วยค่าพับของการเจือจางที่สอดคล้องกัน ในที่สุดก็ได้ความเข้มข้นของ SEM ในตัวอย่าง

 

8. ข้อควรระวัง

 

1) หากอุณหภูมิห้องต่ำกว่า 25 ℃ หรืออุณหภูมิของตัวทำปฏิกิริยาและตัวอย่างไม่กลับสู่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ค่า OD มาตรฐานจะลดลง

2) ในระหว่างกระบวนการซัก การอบแห้งของไมโครเพลทจะมาพร้อมกับความไม่เป็นเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐาน และการทำซ้ำนั้นไม่เหมาะดังนั้นให้ดำเนินการในขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากล้าง

3) ผสมให้เข้ากันไม่เช่นนั้นการทำซ้ำจะไม่ดี

4) สารละลายหยุดคือสารละลายกรดกำมะถัน 2 M หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง

5) อย่าใช้ชุดอุปกรณ์เกินอายุการเก็บรักษาการใช้รีเอเจนต์เจือจางหรือเจือปนจากชุดอุปกรณ์อาจส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความไวและค่า OD การตรวจจับห้ามเปลี่ยนรีเอเจนต์ในชุดอุปกรณ์ต่างๆ

6) ปิดผนึกไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ในถุงซิปล็อคสารละลายมาตรฐานและข้อต่อไม่มีสีไวต่อแสงและไม่สามารถสัมผัสกับแสงได้โดยตรง

7) ทิ้งสารละลายสีใดๆ ที่มีสีแสดงว่าสารละลายเสื่อมสภาพค่าการตรวจจับที่น้อยกว่า 0.5 สำหรับสารละลายมาตรฐาน 1 (0 ppb) บ่งชี้ว่ามีการเสื่อมสภาพ

8) อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25 ℃ และความไวในการตรวจจับและค่า OD จะเปลี่ยนไปหากอุณหภูมิสูงหรือต่ำเกินไป

 

9. วันที่จัดเก็บและวันหมดอายุ

 

การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 องศาเซลเซียส ห้ามแช่แข็ง
วันหมดอายุ: 12 เดือน;วันที่ผลิตอยู่บนกล่อง
หมายเหตุ: หากบรรจุภัณฑ์สูญญากาศไมโครเพลทรั่ว ยังคงสามารถใช้งานได้โดยไม่ส่งผลต่อผลการทดสอบ คุณจึงสามารถใช้งานได้อย่างมั่นใจ

 

Q1: เมื่อไหร่จะถูกจัดส่ง?
A1: เราจะจัดส่งสินค้าให้คุณโดยเร็วที่สุดภายใน 7 วันทำการหลังจากได้รับการชำระเงิน(กรณีปัจจัยภายนอก เช่น โรคระบาด การจัดส่งอาจล่าช้า)

 

Q2: รองรับ OEM / ODM หรือไม่?
A2: รองรับได้ แต่ปริมาณเฉพาะต้องมีมากกว่า 100,000 ชิ้น ซึ่งสะดวกสำหรับผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง

 

Q3: โรงงานของคุณมีการควบคุมคุณภาพอย่างไร?
A3: เราได้รับการรับรองระดับประเทศ ISO9001 และ ISO13485กระบวนการผลิตของเราสอดคล้องกับขั้นตอนมาตรฐานเพื่อให้มั่นใจในคุณภาพของผลิตภัณฑ์ที่เหมาะสมที่สุด

 

Q4: จะให้บริการหลังการขายอย่างไร?
A4: เราให้บริการหลังการขายทางเทคนิคออนไลน์อย่างมืออาชีพเราสามารถให้คำแนะนำแบบตัวต่อตัวผ่านวิดีโอ โทรศัพท์ ฯลฯ

 

Q5: วิธีการชำระเงินคืออะไร?
A5: เราได้รับการชำระเงินโดย T/T

 

Q6: วิธีการจัดส่ง?
A6: เลือกวิธีการจัดส่งที่ดีที่สุดสำหรับคุณโดยรับใบเสนอราคาจากผู้ให้บริการที่ร่วมมือกันหลายรายของเรา และจัดส่งตามความต้องการของคุณ