Nitrofuran AHD ELISA Food Rapid Test Kit แอนติบอดีสำหรับความไวของนม 0.04ppb 96Wells / Kit

Nitrofuran AHD ELISA ชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหารสำหรับความไวของนม 0.04ppb 96Wells/Kit

 

1.ชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหาร Nitrofuran AHD ELISAหลักการ

 

ชุดทดสอบนี้อิงตามการทดสอบเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์สำหรับการตรวจหาอะมิโนไฮแดนชัน (AHD) ในตัวอย่างแอนติเจนของคัปปลิ้งถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กAminohydantion (AHD) ในตัวอย่างและแอนติเจนของคัปปลิ้งที่เคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กจะแข่งขันกันเพื่อแย่งชิงแอนติบอดีต้าน AHDหลังจากการเติมคอนจูเกตของเอ็นไซม์แล้ว ซับสเตรต TMB จะถูกเพิ่มสำหรับการแต่งสีค่าความหนาแน่นเชิงแสง (OD) ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ AHD ในตัวอย่างค่านี้ถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานและจะได้ความเข้มข้นของ AHD ในภายหลัง

 

2.Nitrofuran AHD ELISA ชุดทดสอบความปลอดภัยของอาหาร​ข้อกำหนดทางเทคนิค

 

ความไว: 0.04ppb

อุณหภูมิฟักตัว: 25 ℃

ระยะฟักตัว: 30นาที～15นาที

ขีดจำกัดการตรวจจับ เนื้อเยื่อ ไข่ น้ำผึ้ง: 0.1ppb

อัตราการเกิดปฏิกิริยาข้าม

เอเอชดี 100%

AMOZ < 0.1%

AOZ < 0.1%

SEM < 0.1%

อัตราการฟื้นตัว

ทิชชู่ ไข่ 95±25%

น้ำผึ้ง 75±25%

 

3. ส่วนประกอบ

 

1	แถบไมโครหลุม	12 แถบ 8 ที่ถอดออกได้ แต่ละบ่อ
2	6× สารละลายมาตรฐาน (แต่ละ 1 มล.)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	คอนจูเกตเอนไซม์	7ml	หมวกแดง
4	โซลูชันการทำงานของแอนติบอดี	7ml	หมวกสีน้ำเงิน
5	พื้นผิว A	7ml	หมวกสีขาว
6	พื้นผิวB	7ml	หมวกสีดำ
7	หยุดการแก้ปัญหา	7ml	หมวกสีเหลือง
8	20× บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น	40มล.	หมวกสีขาว
9	น้ำยาละลายซ้ำเข้มข้น 2 เท่า	50ml	หมวกใส
10	2-ไนโตรเบนซาลดีไฮด์ (C7H5NO3)	10มล.	หมวกสีดำ

 

4. วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้

 

1) อุปกรณ์: เครื่องอ่านไมโครเพลท, เครื่องพิมพ์, เครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน, อุปกรณ์ทำแห้งไนโตรเจน, กระแสน้ำวน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปตวัด, สมดุล (ความไวซึ่งกันและกัน 0.01 กรัม), ตู้อบ, อ่างน้ำ;

2) Micropipettors: ช่องสัญญาณเดียว 20-200µL, 100-1000µL และหลายช่องสัญญาณ 30～300µl;

3) รีเอเจนต์: NaOH, เอทิลอะซิเตท, n-Hexane, HCI (ประมาณ 36.5%), K2HPO4·3H2O

 

5. ตัวอย่างก่อนการรักษา

 

คำแนะนำ

ต้องจัดการประเด็นต่อไปนี้ก่อนการบำบัดตัวอย่างชนิดใดๆ ก่อน:

1) เฉพาะทิปแบบใช้แล้วทิ้งเท่านั้นที่สามารถใช้ได้สำหรับการทดลอง และต้องเปลี่ยนทิปเมื่อใช้สำหรับการดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน

2) ก่อนการทดลอง อุปกรณ์ทดลองแต่ละชิ้นต้องสะอาดและควรทำความสะอาดใหม่หากจำเป็น เพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งปนเปื้อนที่รบกวนผลการทดลอง

การเตรียมสารละลายก่อนการบำบัดตัวอย่าง:

ก) 0.1 M K2HPO4: ละลาย 11.4g K2HPO4·3H2O ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 500 มล.

b) 1 M HCl: ละลาย HCI 8.6 มล. (ประมาณ 36.5%) ในน้ำปราศจากไอออนถึง 100 มล.

c) 1 M NaOH: ละลาย 4g NaOH ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 100 มล.

d) สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 2× ถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:1 (สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 1 มล. + น้ำปราศจากไอออน 1 มล.) ที่ใช้สำหรับการละลายตัวอย่างซ้ำ

 

5.1 การเตรียมตัวอย่าง

ก) เนื้อเยื่อ ไข่

1) ชั่งน้ำหนักตัวอย่างที่เป็นเนื้อเดียวกัน 1± 0.05 กรัม เติมน้ำกลั่น 4 มล., HCI 0.5 มล. 1 M และ 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในหลอดแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 ℃ ข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56℃ ด้วยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิฟิเคชันหรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3 มล. ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80 ℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่ และระเหยจนแห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายละลายซ้ำที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000 r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70 ℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

เท่าของการเจือจางของตัวอย่าง: 2

ข) น้ำผึ้ง

1) ชั่งน้ำหนัก 2± 0.05g ของตัวอย่างที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (น้ำผึ้ง) เติมน้ำกลั่น 4 มล., 0.5 มล. 1 M HCI และ 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 ℃ ข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56℃ ด้วยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิไฟเออร์หรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3ml ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่และระเหยให้แห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่อุณหภูมิ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายเจือจางที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70 ℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

เท่าของการเจือจางของตัวอย่าง: 1

 

6. ขั้นตอน ELISA

 

6.1 คำแนะนำ

1) นำรีเอเจนต์และแถบไมโครหลุมทั้งหมดไปที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ก่อนใช้งาน

2) คืนรีเอเจนต์ทั้งหมดไปที่ 2-8 ℃ ทันทีหลังการใช้งาน

3) ความสามารถในการทำซ้ำของการวิเคราะห์ ELISA ในระดับสูง ขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอของการล้างจานการทำงานที่ถูกต้องของการล้างจานเป็นประเด็นสำคัญในกระบวนการของ ELISA;

4) สำหรับการฟักที่อุณหภูมิคงที่ ตัวอย่างและรีเอเจนต์ทั้งหมดต้องหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสง และไมโครเพลทแต่ละแผ่นควรปิดผนึกด้วยเมมเบรนฝาครอบ

 

6.2 ขั้นตอนการปฏิบัติงาน

1) นำชุดทดสอบไปไว้ในอุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที โปรดทราบว่าจะต้องเขย่ารีเอเจนต์แต่ละตัวให้ผสมกันอย่างเท่าเทียมกันก่อนใช้งาน ใส่แถบไมโครหลุมที่ต้องการลงในโครงเพลทปิดผนึกไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้อีกครั้ง เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง

2) การเตรียมสารละลาย: เจือจาง 40 มล. ของบัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น 20 × ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:19 (1 ส่วน 20 × บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น + 19 ส่วนน้ำกลั่น)หรือเตรียมตามความจำเป็น

3) การกำหนดหมายเลข: กำหนดหมายเลขหลุมขนาดเล็กตามตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานแต่ละตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานควรดำเนินการซ้ำกัน บันทึกตำแหน่งของพวกเขา

4) เพิ่มตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน 50µL ลงในหลุมที่ซ้ำกันแยกกันเพิ่ม 50ul เอนไซม์คอนจูเกตจากนั้น 50µL ของสารละลายทำงานของแอนติบอดีลงในแต่ละหลุม ผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือปิดไมโครเพลทด้วยเมมเบรนฝาครอบ และฟักที่อุณหภูมิ 25 ℃ เป็นเวลา 30 นาที

5) เทของเหลวออกจากไมโครเวลล์ ผึ่งให้แห้งบนกระดาษดูดซับ เติมบัฟเฟอร์สำหรับซัก 250µL/หลุม เพื่อล้างไมโครเพลทเป็นเวลา 15-30 วินาที จากนั้นนำออกและผึ่งให้แห้งด้วยกระดาษดูดซับ ทำซ้ำ 4-5 ครั้ง(หากมีฟองหลังจากกระพือ ให้ตัดด้วยปลายที่สะอาด)

6) การลงสี: เพิ่ม 50µL ของซับสเตรต A และ 50µL ของซับสเตรต B ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยตนเอง จากนั้นบ่มที่ 25 ℃ เป็นเวลา 15 นาทีในที่มืดเพื่อทำสี

7) การหาค่า: เติม 50µL ของสารละลายสต็อปลงในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ 450nm เพื่อกำหนดค่า OD ของทุกหลุม(แนะนำให้อ่านค่า OD ที่ความยาวคลื่นคู่ 450/630nm ภายใน 5 นาที)

 

7. การตัดสินผล

 

มีสองวิธีในการตัดสินผลลัพธ์: วิธีแรกคือการตัดสินคร่าวๆ ในขณะที่วิธีที่สองคือการตัดสินเชิงปริมาณโปรดทราบว่าค่า OD ของกลุ่มตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับเนื้อหาของ AHD

7.1 การกำหนดคุณภาพ

ช่วงความเข้มข้น (ng/mL) สามารถหาได้จากการเปรียบเทียบค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างกับค่าของสารละลายมาตรฐานสมมติว่าค่า OD ของ sampleⅠ คือ 0.3 และของ sampleⅡ คือ 1.0ppb ค่า OD ของโซลูชันมาตรฐานคือ: 2.243 สำหรับ 0ppb, 1.816 สำหรับ 0.04ppb, 1.415 สำหรับ 0.12ppb, 0.74 สำหรับ 0.36ppb, 0.313 สำหรับ 1.08 ppb, 0.155 สำหรับ 3.24ppb ดังนั้น ช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างⅠ คือ 1.08 ถึง 3.24ppb และของตัวอย่างⅡ คือ 0.12 ถึง 0.36ppb

7.2 การกำหนดเชิงปริมาณ

หาค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงสำหรับค่า OD เฉลี่ย (B) ของตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานหารด้วยค่า OD (B0) ของสารละลายมาตรฐานแรก (0 มาตรฐาน) และคูณด้วย 100% ในเวลาต่อมา นั่นคือ ,

เปอร์เซ็นต์ของค่าการดูดกลืนแสง =	บี	×100%
	B0

B—ค่า OD เฉลี่ย (หลุมคู่) ของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน

B0—ค่า OD เฉลี่ยของสารละลายมาตรฐาน 0ng/mL

วาดเส้นโค้งมาตรฐานด้วยเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนของสารละลายมาตรฐานและค่าเซมิลอการิทึมของสารละลายมาตรฐาน AHD (ng/mL) เป็นแกน Y และ X ตามลำดับอ่านความเข้มข้นที่สอดคล้องกันของตัวอย่างจากกราฟมาตรฐานโดยรวมเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนเข้าไปในกราฟมาตรฐานค่าที่เป็นผลลัพธ์จะถูกคูณในเวลาต่อมาด้วยการพับของการเจือจางที่สอดคล้องกัน ในที่สุดก็ได้ความเข้มข้นของ AHD ในตัวอย่าง

 

8. ข้อควรระวัง

 

1) อุณหภูมิห้องต่ำกว่า 25 ℃ หรืออุณหภูมิของตัวทำปฏิกิริยาและตัวอย่างจะไม่กลับสู่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ซึ่งจะทำให้ค่า OD มาตรฐานลดลง

2) ในระหว่างกระบวนการซัก การอบแห้งของไมโครเพลทจะมาพร้อมกับความไม่เป็นเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐานและการทำซ้ำที่ไม่น่าพอใจดังนั้นให้ดำเนินการในขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากล้าง

3) ผสมให้เข้ากัน มิฉะนั้นจะทำซ้ำได้ไม่ดี

4) สารละลายสต็อปคือสารละลายกรดซัลฟิวริก 2 M หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง

5) อย่าใช้ชุดเกินกว่าวันหมดอายุการใช้รีเอเจนต์เจือจางหรือเจือปนจากชุดอุปกรณ์อาจส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความไวและค่า OD การตรวจจับห้ามเปลี่ยนรีเอเจนต์ในชุดอุปกรณ์ต่างๆ

6) ปิดผนึกไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้อีกครั้งในถุงปิดผนึกตัวเองสารละลายมาตรฐานและข้อต่อไม่มีสีไวต่อแสงและไม่สามารถสัมผัสกับแสงได้โดยตรง

7) ทิ้งสารละลายย้อมสีที่มีสีแสดงว่าสารละลายเสื่อมสภาพค่าการตรวจจับที่น้อยกว่า 0.5 สำหรับสารละลายมาตรฐาน 1 (0 ppb) บ่งชี้ว่ามีการเสื่อมสภาพ

8) อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25 ℃ และความไวในการตรวจจับและค่า OD จะเปลี่ยนไปหากอุณหภูมิสูงหรือต่ำเกินไป

 

9. วันที่จัดเก็บและวันหมดอายุ

 

การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2 ถึง 8 ℃ ไม่แช่แข็ง

วันหมดอายุ: 12 เดือน;วันที่ผลิตอยู่บนกล่อง

หมายเหตุ: หากแพ็คเกจสูญญากาศของไมโครเพลทเกิดการรั่วซึม ยังคงใช้ได้อยู่ ไม่ส่งผลต่อผลการทดสอบ โปรดผ่อนคลายในการใช้งาน

 

 

Q1: เมื่อไหร่จะถูกจัดส่ง?
A1: เราจะจัดส่งสินค้าให้คุณโดยเร็วที่สุดภายใน 7 วันทำการหลังจากได้รับการชำระเงิน(ในกรณีที่เกิดโรคระบาดและปัจจัยภายนอกอื่นๆ อาจมีความล่าช้าในการจัดส่ง)

 

Q2: รองรับ OEM / ODM หรือไม่?
A2: รองรับได้ แต่ปริมาณเฉพาะต้องมีมากกว่า 100,000 ชิ้นเพื่ออำนวยความสะดวกให้กับผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง

 

Q3: โรงงานของคุณมีการควบคุมคุณภาพอย่างไร?
A3: เรามี ISO9001 และ ISO13485 ที่ได้รับการรับรองจากรัฐกระบวนการผลิตของเราเป็นไปตามกระบวนการมาตรฐาน ซึ่งสามารถมั่นใจได้ว่าคุณภาพของผลิตภัณฑ์จะเหมาะสมที่สุด

 

Q4: มีบริการหลังการขายอย่างไร?
A4: เราให้บริการหลังการขายทางเทคนิคออนไลน์อย่างมืออาชีพเราสามารถให้คำแนะนำแบบตัวต่อตัวในรูปแบบของวิดีโอ โทรศัพท์ ฯลฯ

 

Q5: วิธีการชำระเงินคืออะไร?
A5: เราได้รับการชำระเงินโดย T/T

 

Q6: วิธีการจัดส่ง?
A6: โดยการขอใบเสนอราคาจากผู้ให้บริการที่ให้ความร่วมมือหลายรายของเรา ให้เลือกวิธีที่ดีที่สุดในการจัดส่งให้กับคุณ หรือคุณสามารถจัดส่งตามความต้องการของคุณ