Nitrofuran AOZ Kit Test ELISA สำหรับกุ้งปลา น้ำผึ้ง ความไว 0.01ppb 96Wells/Kit

Nitrofuran AOZ ELISA ชุดทดสอบสำหรับปลากุ้งน้ำผึ้งความไว 0.01ppb 96Wells/Kit

 

1. หลักการ

นี้ food ชุดทดสอบความปลอดภัยอย่างรวดเร็วอิงจากการทดสอบเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์เพื่อตรวจหา AOZ ในตัวอย่างแอนติเจนของคัปปลิ้งถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กAOZ ในตัวอย่างและแอนติเจนของการมีเพศสัมพันธ์ที่เคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กจะแข่งขันกันเพื่อแย่งชิงแอนติบอดีต้าน AOZหลังจากการเติมคอนจูเกตของเอ็นไซม์แล้ว ซับสเตรต TMB จะถูกเพิ่มสำหรับการแต่งสีค่าความหนาแน่นเชิงแสง (OD) ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ AOZ ในตัวอย่างค่านี้ถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานและจะได้ความเข้มข้นของ AOZ ในภายหลัง

2. ส่วนประกอบ

1	แถบไมโครหลุม	12 แถบ 8 ที่ถอดออกได้ แต่ละบ่อ
2	6× สารละลายมาตรฐาน (แต่ละ 1 มล.)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	คอนจูเกตเอนไซม์	7ml	หมวกแดง
4	โซลูชันการทำงานของแอนติบอดี	7ml	หมวกสีน้ำเงิน
5	พื้นผิว A	7ml	หมวกสีขาว
6	พื้นผิวB	7ml	หมวกสีดำ
7	หยุดการแก้ปัญหา	7ml	หมวกสีเหลือง
8	20× บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น	40มล.	หมวกสีขาว
9	น้ำยาละลายซ้ำเข้มข้น 2 เท่า	50ml	หมวกใส
10	2-ไนโตรเบนซาลดีไฮด์ (C7H5NO3)	10มล.	หมวกสีดำ

 

3. ข้อกำหนดทางเทคนิค

ความไว: 0.01ppb

อุณหภูมิฟักตัว: 25 ℃

ระยะฟักตัว: 30นาที～15นาที

ขีดจำกัดการตรวจจับ

เนื้อเยื่อ ไข่ น้ำผึ้ง: 0.05ppb

อัตราการเกิดปฏิกิริยาข้าม

ออซ 100%

AMOZ <0.1%

เอเอชดี <0.1%

SEM <0.1%

อัตราการฟื้นตัว

ทิชชู่ ไข่ 95±25%

น้ำผึ้ง 85±23%

 

4. วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้

1) อุปกรณ์: เครื่องอ่านไมโครเพลท, เครื่องพิมพ์, เครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน, อุปกรณ์ทำแห้งไนโตรเจน, กระแสน้ำวน, เครื่องหมุนเหวี่ยง, ปิเปตวัด, สมดุล (ความไวซึ่งกันและกัน 0.01 กรัม), ตู้อบ, อ่างน้ำ;

2) Micropipettors: ช่องสัญญาณเดียว 20-200 µL, 100-1000 µL และหลายช่องสัญญาณ 30～300 µl;

3) รีเอเจนต์: NaOH, เอทิลอะซิเตท, n-Hexane, HCI (ประมาณ 36.5%), K2HPO4·3H2O

 

5. ตัวอย่างก่อนการรักษา

คำแนะนำ

ต้องจัดการประเด็นต่อไปนี้ก่อนการบำบัดตัวอย่างชนิดใดๆ ก่อน:

1) เฉพาะทิปแบบใช้แล้วทิ้งเท่านั้นที่สามารถใช้ได้สำหรับการทดลอง และต้องเปลี่ยนทิปเมื่อใช้สำหรับการดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน

2) ก่อนการทดลอง อุปกรณ์ทดลองแต่ละชิ้นต้องสะอาดและควรทำความสะอาดใหม่หากจำเป็น เพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งปนเปื้อนที่รบกวนผลการทดลอง

การเตรียมสารละลายก่อนการบำบัดตัวอย่าง:

1) 0.1 M K2HPO4: ละลาย 11.4 g K2HPO4·3H2O ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 500 มล.

2) 1 M HCl: ละลาย HCI 8.6 มล. (ประมาณ 36.5%) ในน้ำปราศจากไอออนถึง 100 มล.

3) 1 M NaOH: ละลาย 4g NaOH ในน้ำปราศจากไอออนเป็น 100 มล.

4) สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 2× ถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:1 (สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 1 มล. + น้ำปราศจากไอออน 1 มล.) ที่ใช้สำหรับการละลายตัวอย่างซ้ำ

 

5.1 การเตรียมตัวอย่าง

เอ)ทิชชู่ ไข่

1) ชั่งน้ำหนักตัวอย่างที่เป็นเนื้อเดียวกัน 1± 0.05 กรัม เติมน้ำกลั่น 4 มล., HCI 0.5 มล. 1 M และ 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในหลอดแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียสโดยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิฟิเคชั่นหรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3ml ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่ และระเหยจนแห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายละลายซ้ำที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000 r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

เท่าของการเจือจางของตัวอย่าง: 2

 

ข) น้ำผึ้ง

1) ชั่งน้ำหนัก 2± 0.05g ของตัวอย่างที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (น้ำผึ้ง) เติมน้ำกลั่น 4 มล., 0.5 มล. 1 M HCI และ 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ลงในแต่ละหลอด เขย่าอย่างถูกต้องเป็นเวลา 2 นาที

2) ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสข้ามคืน (ประมาณ 16 ชั่วโมง) หรือฟักที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียสโดยอ่างน้ำ (2 ชั่วโมง)

3) เพิ่ม 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH และ 6mL ethyl acetate ลงในแต่ละหลอด เขย่า 30 วินาที

4) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃) เป็นเวลา 10 นาที (หากมีอิมัลซิไฟเออร์หรือชั้นเอทิลอะซิเตตไม่เพียงพอสำหรับ 3ml ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 80℃ เป็นเวลา 10 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ หรือเพิ่มความเร็ว และยืดเวลาการหมุนเหวี่ยง)

5) ถ่ายเทชั้นเอทิลอะซิเตท 3 มล. ลงในหลอดแบบแรงเหวี่ยงใหม่และระเหยให้แห้งด้วยไนโตรเจนหรืออากาศที่อุณหภูมิ 50 ℃

6) ละลายสารตกค้างที่แห้งใน N-hexane ขนาด 2 มล. เติมสารละลายเจือจางที่เจือจางแล้ว 1 มล. ผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 30 วินาที ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลา 10 นาทีลบเฟส N-hexane ชั้นบนออก (ถ้ามี Emulsification หลังจากลบเฟส N-hexane ชั้นบนแล้ว ให้ฟักตัวอย่างที่อ่างน้ำ 70℃ เป็นเวลา 10-20 นาที แล้วหมุนเหวี่ยงซ้ำๆ )

7) นำ 50 µL ของส่วนล่างมาวิเคราะห์

พับของการเจือจางของตัวอย่าง:1

 

6. ขั้นตอน ELISA

6.1 คำแนะนำ

1) นำรีเอเจนต์และแถบไมโครหลุมทั้งหมดไปที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) ก่อนใช้งาน

2) คืนรีเอเจนต์ทั้งหมดไปที่ 2-8 ℃ ทันทีหลังการใช้งาน

3) ความสามารถในการทำซ้ำของการวิเคราะห์ ELISA ในระดับสูง ขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอของการล้างจานการทำงานที่ถูกต้องของการล้างจานเป็นประเด็นสำคัญในกระบวนการของ ELISA;

4) สำหรับการฟักที่อุณหภูมิคงที่ ตัวอย่างและรีเอเจนต์ทั้งหมดต้องหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสง และไมโครเพลทแต่ละแผ่นควรปิดผนึกด้วยเมมเบรนฝาครอบ

 

6.2 ขั้นตอนการดำเนินงาน

1)นำชุดทดสอบไปไว้ในอุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) เป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที โปรดทราบว่าจะต้องเขย่ารีเอเจนต์แต่ละตัวให้ผสมกันอย่างเท่าเทียมกันก่อนใช้งาน ใส่แถบไมโครหลุมที่ต้องการลงในโครงเพลทปิดผนึกไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้อีกครั้ง เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง

2)การเตรียมสารละลาย: เจือจาง 40 มล. ของบัฟเฟอร์สำหรับล้างเข้มข้น 20 × ด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:19 (1 ส่วน 20 × บัฟเฟอร์สำหรับล้างเข้มข้น + 19 ส่วนน้ำปราศจากไอออน)หรือเตรียมตามความจำเป็น.

3)การกำหนดหมายเลข: กำหนดหมายเลขหลุมขนาดเล็กตามตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานแต่ละตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานควรดำเนินการซ้ำกัน บันทึกตำแหน่งของพวกเขา

4)เพิ่ม 50 µL ของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐานลงในหลุมที่ซ้ำกันแยกกันเพิ่ม 50 ul เอนไซม์คอนจูเกตจากนั้น 50 ไมโครลิตรของสารละลายทำงานของแอนติบอดีลงในแต่ละหลุม ผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือปิดผนึกไมโครเพลทด้วยเมมเบรนฝาครอบ และฟักที่อุณหภูมิ 25 ℃ เป็นเวลา 30 นาที

5)เทของเหลวออกจากไมโครเวลล์ ผึ่งให้แห้งบนกระดาษดูดซับ เติมบัฟเฟอร์สำหรับซัก 250 ไมโครลิตร/หลุม เพื่อล้างไมโครเพลทเป็นเวลา 15-30 วินาที จากนั้นนำออกและผึ่งให้แห้งด้วยกระดาษดูดซับ ทำซ้ำ 4-5 ครั้ง(หากมีฟองหลังจากกระพือ ให้ตัดด้วยปลายที่สะอาด)

6)การลงสี: เพิ่ม 50 µL ของซับสเตรต A และ 50 µL ของซับสเตรต B ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยตนเอง แล้วบ่มที่ 25 ℃ เป็นเวลา 15 นาทีที่มืดสำหรับสี

7)การกำหนด: เติม 50 µL ของสารละลายสต็อปลงในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ 450nm เพื่อกำหนดค่า OD ของทุกหลุม(แนะนำให้อ่านค่า OD ที่ความยาวคลื่นคู่ 450/630nm ภายใน 5 นาที)

 

7. การตัดสินผล

มีสองวิธีในการตัดสินผลลัพธ์: วิธีแรกคือการตัดสินคร่าวๆ ในขณะที่วิธีที่สองคือการตัดสินเชิงปริมาณโปรดทราบว่าค่า OD ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับความเข้มข้นของ AOZ

7.1 การกำหนดคุณภาพ

ช่วงความเข้มข้น (ng/mL) ของ AOZ สามารถหาได้จากการเปรียบเทียบค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างกับค่าของสารละลายมาตรฐานสมมติว่าค่า OD ของ sampleⅠ คือ 0.3 และของ sampleⅡ คือ 1.0 ค่า OD ของโซลูชันมาตรฐานคือ: 2.243 สำหรับ 0ppb, 1.816 สำหรับ 0.01ppb, 1.415 สำหรับ 0.03ppb, 0.74 สำหรับ 0.09ppb, 0.313 สำหรับ 0.27ppb , 0.155 สำหรับ 0.81ppb ตามช่วงความเข้มข้นของตัวอย่างⅠ คือ 0.27ppb ถึง 0.81ppb และของกลุ่มตัวอย่างⅡ คือ 0.03ppb ถึง 0.09ppb

7.2 การกำหนดเชิงปริมาณ

หาค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงสำหรับค่า OD เฉลี่ย (B) ของตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานหารด้วยค่า OD (B0) ของสารละลายมาตรฐานแรก (0 มาตรฐาน) และคูณด้วย 100% ในเวลาต่อมา นั่นคือ ,

 

เปอร์เซ็นต์ของค่าการดูดกลืนแสง =	บี	×100%
	B0

 

B—ค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน

B0—ค่า OD เฉลี่ยของสารละลายมาตรฐาน 0 ng/mL

วาดเส้นโค้งมาตรฐานด้วยเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนของสารละลายมาตรฐานและค่าเซมิลอการิทึมของสารละลายมาตรฐาน AOZ (ng/mL) เป็นแกน Y และ X ตามลำดับอ่านความเข้มข้นที่สอดคล้องกันของตัวอย่างจากกราฟมาตรฐานโดยรวมเปอร์เซ็นต์การดูดกลืนเข้าไปในกราฟมาตรฐานค่าผลลัพธ์จะถูกคูณในเวลาต่อมาด้วยการคูณด้วยการเจือจางที่สัมพันธ์กัน ในที่สุดก็ได้ความเข้มข้นของ AOZ ในตัวอย่าง

 

8. ข้อควรระวัง

1)อุณหภูมิห้องต่ำกว่า 25 ℃ หรืออุณหภูมิของรีเอเจนต์และตัวอย่างที่ไม่คืนสู่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) จะทำให้ค่า OD มาตรฐานต่ำลง

2)ความแห้งกร้านของไมโครเพลทในกระบวนการซักจะมาพร้อมกับสถานการณ์ต่างๆ รวมถึงเส้นโค้งมาตรฐานที่ไม่เป็นเชิงเส้นและการทำซ้ำที่ไม่ต้องการดังนั้นให้ทำตามขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากล้าง

3)ผสมให้เข้ากันไม่เช่นนั้นจะเกิดการทำซ้ำที่ไม่พึงประสงค์

4)สารละลายสต็อปคือสารละลายกรดซัลฟิวริก 2 M หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง

5)อย่าใช้ชุดอุปกรณ์เกินวันหมดอายุการใช้รีเอเจนต์เจือจางหรือเจือปนจากชุดอุปกรณ์จะนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในความไวและค่า OD ที่ตรวจจับได้ห้ามเปลี่ยนรีเอเจนต์จากชุดอุปกรณ์ของล็อตต่างๆ เพื่อใช้

6)ใส่ไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ลงในถุงปิดผนึกอัตโนมัติเพื่อปิดผนึกใหม่สารละลายมาตรฐานและสีแบบไม่มีสีมีความไวต่อแสง ดังนั้นจึงไม่สามารถสัมผัสกับแสงได้โดยตรง

7)ทิ้งสารละลายสีที่มีสีใดๆ ที่บ่งบอกถึงการเสื่อมสภาพของสารละลายนี้ค่าการตรวจจับของสารละลายมาตรฐาน 1(0 ppb) ที่น้อยกว่า 0.5 บ่งชี้ว่ามีการเสื่อมสภาพ

8)อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25 ℃ และอุณหภูมิสูงหรือต่ำเกินไปจะส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความไวในการตรวจจับและค่า OD

 

9. วันที่จัดเก็บและวันหมดอายุ

การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง

วันหมดอายุ: 12 เดือน;วันที่ผลิตอยู่บนกล่อง

หมายเหตุ: หากแพ็คเกจสูญญากาศของไมโครเพลทเกิดการรั่วซึม ยังคงใช้ได้อยู่ ไม่ส่งผลต่อผลการทดสอบ โปรดผ่อนคลายในการใช้งาน

 

 

Q1: จะใช้เวลานานเท่าไรในการจัดส่ง?
A1: โดยปกติจัดส่งภายใน 7 วันทำการ

 

Q2: คุณสนับสนุน OEM / ODM หรือไม่?
A2: สามารถรองรับได้เราสามารถปรับแต่งตามความต้องการเฉพาะและปริมาณเฉพาะของคุณได้

 

Q3: โรงงานของคุณมีการควบคุมคุณภาพอย่างไร?
A3: เรามีการรับรอง ISO9001 และ ISO13485 จนถึงขณะนี้กระบวนการผลิตทั้งหมด เรามีกฎมาตรฐาน เราปฏิบัติตามพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องและกฎหมายของรัฐบาล

 

Q4: รับประกันบริการหลังการขายหรือไม่?
A4: เราให้บริการหลังการขายทางเทคนิคออนไลน์อย่างมืออาชีพหากสินค้าไม่ผ่านระหว่างการทดลอง เราสามารถจัดหาให้
คำแนะนำแบบตัวต่อตัวทางโทรศัพท์ วิดีโอ และแบบฟอร์มอื่นๆ

 

Q5: ปริมาณการสั่งซื้อขั้นต่ำของคุณคืออะไร?
A5: 1Kit.

 

Q6: วิธีการจัดส่งคืออะไร?
A6: สามารถจัดส่งโดยด่วน (FEDEX, UPS, DHL, EMS, ฯลฯ ) หรือทางอากาศและทางบก โปรดยืนยันกับเราก่อนทำการสั่งซื้อ