0.1ppb Zearalenone ชุดทดสอบสารพิษจากเชื้อราสำหรับข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ 96 Wells/Kit

ชุดทดสอบ Zearalenone ELISA สำหรับข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ 96 Wells/Kit Sensitivity 0.1 ppb

 

1. หลักการ

ชุดทดสอบนี้ใช้การทดสอบเอนไซม์อิมมูโนแอสเซย์เพื่อตรวจหาซีราเลโนนแอนติเจนของคัปปลิ้งถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กซีราลีโนนในตัวอย่างและแอนติเจนของคัปปลิ้งที่เคลือบไว้ล่วงหน้าบนแถบหลุมขนาดเล็กจะแข่งขันกันเพื่อชิงแอนติบอดีต้านซีราเลโนนหลังจากการเติมคอนจูเกตของเอ็นไซม์แล้ว ซับสเตรต TMB จะถูกเพิ่มสำหรับการแต่งสีค่าความหนาแน่นเชิงแสง (OD) ของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับซีราเลโนนในตัวอย่างค่านี้ถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานและได้ซีราลีโนนเรซิดิวในภายหลัง

2. ข้อกำหนดทางเทคนิค

ความไว: 0.1 ppb
อุณหภูมิตู้ฟักไข่: 25℃
เวลาฟักไข่: 30นาที～15นาที

ขีด จำกัด การตรวจจับ:
ฟีด 10ppb
ข้าว ข้าวโพด ถั่วลิสง 5ppb

อัตราการเกิดปฏิกิริยาข้าม:
ซีราเลโนน 100%

อัตราการฟื้นตัว:
อาหาร ข้าว ถั่วลิสง ข้าวโพด 100±30%

3. ส่วนประกอบ

 

 

1	แถบไมโครหลุม	12 แถบ โดยแต่ละหลุมถอดได้ 8 หลุม
2	6× สารละลายมาตรฐาน (แต่ละ 1 มล.)	0 ppb	0.1 ppb
		0.3 ppb	0.9 ppb
		2.7 ppb	8.1 ppb
3	คอนจูเกตเอนไซม์	7 มล	หมวกแดง
4	โซลูชันการทำงานของแอนติบอดี	7 มล	หมวกสีน้ำเงิน
5	พื้นผิว A	7 มล	หมวกสีขาว
6	พื้นผิวB	7 มล	หมวกสีดำ
7	หยุดการแก้ปัญหา	7 มล	หมวกสีเหลือง
8	บัฟเฟอร์การซัก 20X เข้มข้น	40 มล	หมวกสีขาว
9	น้ำยาละลายซ้ำเข้มข้น 2X	50 มล	หมวกใส

 

4. วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้

1) อุปกรณ์: เครื่องอ่าน ELISA (450 นาโนเมตร/630 นาโนเมตร), โฮโมจีไนเซอร์, เชคเกอร์, เครื่องหมุนเหวี่ยง, สมดุล: ไวต่อปริมาณ 0.01 กรัม, อุปกรณ์ทำแห้งด้วยไนโตรเจน, ตู้อบ, ปิเปตที่สำเร็จการศึกษา, เครื่องพิมพ์
2) Micropipettes: ช่องเดียว 20l ~ 200l, 100l ~ 1000l, หลายช่องสัญญาณ 30 ~ 300 μl
3) รีเอเจนต์: เมทานอล เอ็น-เฮกเซน

5. ตัวอย่างก่อนการรักษา

คำแนะนำ (ต้องจัดการประเด็นต่อไปนี้ก่อนการรักษา)
1) เฉพาะทิปแบบใช้แล้วทิ้งเท่านั้นที่สามารถใช้ได้สำหรับการทดลอง และต้องเปลี่ยนทิปเมื่อใช้สำหรับการดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน
2) ก่อนการทดลอง อุปกรณ์ทดลองแต่ละชิ้นจะต้องสะอาดและควรทำความสะอาดใหม่หากจำเป็น เพื่อหลีกเลี่ยงสิ่งปนเปื้อนที่รบกวนผลการทดลอง

การเตรียมสารละลายก่อนการบำบัดตัวอย่าง:
โซลูชันหมายเลข1: ตัวอย่างการละลายซ้ำ
สารละลายละลายซ้ำแบบเข้มข้น 2× ถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ 1:1 (สารละลายที่ละลายซ้ำแบบเข้มข้น 1 ส่วน + น้ำปราศจากไอออน 1 ส่วน) ที่ใช้สำหรับการละลายตัวอย่างซ้ำ
โซลูชันหมายเลข2: สารละลายสารสกัดตัวอย่าง
เมทานอล 7 ส่วน + น้ำปราศจากไอออน 3 ส่วน เพื่อให้ได้สารละลายตัวอย่างพร้อมใช้

การเตรียมตัวอย่าง
5.1 การเตรียมตัวอย่างอาหารสัตว์
1) นำตัวอย่างอาหารบด 1.0 ± 0.05 กรัมใส่ในหลอดปั่นแยก 50 มล. เพิ่มสารละลายสารสกัดตัวอย่าง 5 มล.
2) เขย่าจนสุดเป็นเวลา 3 นาที (หรือเขย่าด้วยมือนานกว่า 5 นาที) ปั่นแยกที่ระดับสูงกว่า 4000r/min ที่ 20 ℃ เป็นเวลา 10 นาที
3) ใช้ supernatant 50ul (บนชั้น) เพิ่มตัวอย่าง 950ul ละลายอีกครั้งเขย่าให้เท่ากัน
4) ใช้50μlเพื่อทดสอบ
ปัจจัยการเจือจาง: 100
หมายเหตุ: หากความเข้มข้นของสารตกค้างของยาในตัวอย่างอยู่นอกช่วงเส้นโค้ง สามารถเจือจางตัวอย่างเพิ่มเติมสำหรับการทดสอบ (เช่น: นำสารเหนือตะกอนที่ลอยอยู่ด้านบน 50ul (ชั้นบน) ไปใส่ในหลอดสำหรับการปั่นแยกใหม่ เติมน้ำปราศจากไอออน 1450ul ปัจจัยการเจือจาง คือ 150 ).

5.2การเตรียมข้าวโพด ตัวอย่างข้าว
1) นำตัวอย่างที่บดแล้ว 1.0 ± 0.05g ลงในหลอดหมุนเหวี่ยง 50 มล.เพิ่มสารละลายสารสกัดตัวอย่าง 5 มล.
2) เขย่าจนสุดเป็นเวลา 3 นาที (หรือเขย่าด้วยมือนานกว่า 5 นาที) ปั่นแยกที่ระดับสูงกว่า 4000r/min ที่ 20 ℃ เป็นเวลา 10 นาที
3) ใช้ supernatant 100ul (บนชั้น) เพิ่มตัวอย่าง 900ul ละลายอีกครั้งเขย่าให้เท่ากัน
4) ใช้50μlเพื่อทดสอบ
ปัจจัยการเจือจาง: 50
หมายเหตุ: หากความเข้มข้นของยาตกค้างในตัวอย่างอยู่นอกช่วงเส้นโค้ง สามารถเจือจางตัวอย่างเพิ่มเติมสำหรับการทดสอบ (เช่น: นำสารเหนือตะกอนที่ลอยอยู่ด้านบน 50ul (ชั้นบน) ไปใส่ในหลอดสำหรับการปั่นแยกใหม่ เติมน้ำปราศจากไอออน 950 ตัว ปัจจัยการเจือจาง คือ 100)

5.3 การเตรียมตัวอย่างถั่วลิสง
1) นำตัวอย่างถั่วลิสงบด 1.0±0.05g ลงในหลอดปั่นแยกขนาด 50 มล.เพิ่มสารละลายสารสกัดตัวอย่าง 5 มล. จากนั้นเติมเอ็น-เฮกเซน 4 มล.
2) เขย่าจนสุด 3 นาที (หรือเขย่าด้วยมือนานกว่า 5 นาที) ปั่นแยกที่อุณหภูมิสูงกว่า 4000r/min ที่ 20℃ เป็นเวลา 10 นาที
3) ทิ้งของเหลวใสชั้นบน ใช้ของเหลวชั้นกลาง 100ul เพิ่มตัวอย่าง 900ul ละลาย เขย่าให้เท่า ๆ กัน
4) ใช้50μlเพื่อทดสอบ
ปัจจัยการเจือจาง: 50
หมายเหตุ: หากความเข้มข้นของยาตกค้างของตัวอย่างอยู่นอกช่วงเส้นโค้ง สามารถเจือจางตัวอย่างเพิ่มเติมสำหรับการทดสอบได้ (เช่น: นำของเหลวชั้นกลาง 50ul ลงในหลอดสำหรับการปั่นแยกใหม่ เติมน้ำปราศจากไอออน 950 ตัว ปัจจัยการเจือจางคือ 100 ).

 

6. ขั้นตอน ELISA

6.1 คำแนะนำ
1. นำน้ำยา ELISA ไปที่อุณหภูมิห้อง (20 - 25 °C) ก่อนใช้งาน
2. ใส่รีเอเจนต์ ELISA กลับไปที่ 2-8 ℃ ทันทีหลังการใช้งาน
3. ความสามารถในการทำซ้ำของ ELISA ในกระบวนการวิเคราะห์นั้นขึ้นอยู่กับความสม่ำเสมอของแผ่นซักเป็นส่วนใหญ่ การทำงานของแผ่นล้างที่ถูกต้องคือจุดกำหนด โปรแกรม ELISA
4. ในทุกกระบวนการของการบ่มที่อุณหภูมิคงที่ หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับแสง ผนึกไมโครเพลทด้วยเมมเบรนที่ครอบ

6.2 ขั้นตอนการปฏิบัติงาน

1. วางชุดอุปกรณ์ไว้ที่อุณหภูมิห้อง (20-25°C) เป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที โปรดทราบว่าแต่ละน้ำยาต้องเขย่าขวดก่อนใช้งาน
2. วางแถบไมโครเวลล์ที่ต้องการลงในโครงเพลทไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ควรปิดผนึกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8°C ห้ามแช่แข็ง
3. การเตรียมสารละลาย: ใช้บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น 20× 40 มล. แล้วละลายในน้ำปราศจากไอออนในอัตราส่วน 1:19 (บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น 20 เท่า 1 ส่วน + น้ำกำจัดไอออน 19 ส่วน) หรือเตรียมตามต้องการ
4. การกำหนดหมายเลข: กำหนดหมายเลข microwells ตามตัวอย่างและโซลูชันมาตรฐานแต่ละตัวอย่างและสารละลายมาตรฐานควรทำซ้ำกันบันทึกตำแหน่งของพวกเขา
5. เพิ่มมาตรฐาน/ตัวอย่าง: เพิ่มตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน 50 ไมโครลิตรเพื่อแยกหลุมคู่ จากนั้นเพิ่มคอนจูเกตของเอนไซม์ 50 ไมโครลิตร/หลุมจากนั้นสารละลายทำงานของแอนติบอดี 50 ไมโครลิตร/หลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือ ปิดไมโครเพลทด้วยฟิล์มคลุม แล้วฟักที่อุณหภูมิ 25 °C เป็นเวลา 30 นาทีในที่มืด
6. ล้างไมโครเพลท: เปิดแผ่นฟิล์มอย่างระมัดระวังและเทของเหลวลงในไมโครเวลล์เติมบัฟเฟอร์สำหรับล้าง 250 ไมโครลิตร/หลุม ล้างให้สะอาด 4-5 ครั้ง ครั้งละ 15-30 วินาที จากนั้นนำกระดาษซับซับออกให้แห้ง(ทิ่มฟองอากาศด้วยหอกที่ไม่ได้ใช้หลังจากการทำให้แห้ง)
7. การพัฒนาสี: เติมสารละลาย Substrate A 50 µL ลงในแต่ละหลุม ตามด้วย Solution B 50 µL ผสมเบาๆ โดยเขย่าจานด้วยมือและบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 25 °C ในที่มืดเพื่อย้อม
8. การทดสอบ: เพิ่ม Stop Solution 50 µL ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยเขย่าจานด้วยมือตั้งค่าความยาวคลื่นของเครื่องอ่านไมโครเพลทเป็น 450 นาโนเมตรเพื่อกำหนดค่า OD ของแต่ละหลุม(แนะนำให้อ่านค่า OD ที่ความยาวคลื่นคู่ 450/630 นาโนเมตรภายใน 5 นาที)

 

7. การตัดสินผล

มีสองวิธีในการตัดสินผลลัพธ์อันแรกคือการตัดสินคร่าวๆ ในขณะที่อันที่สองคือการกำหนดเชิงปริมาณโปรดทราบว่าค่า OD ของกลุ่มตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ Zearalenone ในตัวอย่าง
7.1 การกำหนดคุณภาพ
ช่วงความเข้มข้น (ppb) สามารถหาได้โดยการเปรียบเทียบค่าการดูดกลืนแสงเฉลี่ยกับค่ามาตรฐานสมมติว่าค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่หนึ่งคือ 0.3 ตัวอย่างที่สองคือ 1.0 และค่ามาตรฐานคือ 0ppb ของ 2.2430.1ppb จาก 1.816;0.3ppb ของ 1.415;0.9ppb จาก 0.74;2.7ppb ของ 0.313;8.1ppb ของ 0.155จากนั้นความเข้มข้นของตัวอย่างจะอยู่ในช่วง 2.7ppb ~ 8.1ppb;ตัวอย่างที่สองคือ 0.3ppb ~ 0.9ppbช่วงความเข้มข้นของซีราเลโนนในตัวอย่างสามารถหาได้จากการคูณด้วยการเจือจางตัวอย่างที่สอดคล้องกัน
7. 2 การวิเคราะห์เชิงปริมาณ
ในการคำนวณความเข้มข้นของตัวอย่าง ควรทำเส้นโค้งมาตรฐานก่อนที่จะสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน แนวคิดของ % การดูดกลืนแสงควรรู้
การคำนวณ % การดูดกลืนแสง:

 

เปอร์เซ็นต์ของค่าการดูดกลืนแสง =	บี	×100%
	B0

B—ค่า OD เฉลี่ยของตัวอย่างหรือสารละลายมาตรฐาน
B0—ค่า OD เฉลี่ยของสารละลายมาตรฐาน 0 ng/mL
มาตรฐานศูนย์จึงเท่ากับ 100% และค่าการดูดกลืนแสงจะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ค่าที่คำนวณสำหรับมาตรฐานจะถูกป้อนในระบบพิกัดบนกระดาษกราฟเซมิลอการิทึมเทียบกับความเข้มข้นของซีราเลโนน [ng/mL]ความเข้มข้นของซีราเลโนนในหน่วยนาโนกรัม/มิลลิลิตรที่สอดคล้องกับค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละตัวอย่างสามารถอ่านได้จากกราฟการปรับเทียบ
ซอฟต์แวร์พิเศษสำหรับการวิเคราะห์ผลลัพธ์ของ ELISA จะอำนวยความสะดวกในการพิจารณาสองครั้งหรือหลายครั้งหากท่านต้องการ กรุณาโทรสอบถาม

8. ข้อควรระวัง

1. อุณหภูมิห้องต่ำกว่า 25 ℃ หรืออุณหภูมิของรีเอเจนต์และตัวอย่างที่ไม่คืนสู่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃) จะทำให้ค่า OD มาตรฐานต่ำลง
2. ความแห้งของไมโครเพลทในกระบวนการซักจะมาพร้อมกับสถานการณ์ต่างๆ รวมถึงเส้นโค้งมาตรฐานที่ไม่เป็นเชิงเส้นและการทำซ้ำที่ไม่ต้องการดังนั้นให้ทำตามขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากล้าง
3. ผสมให้เข้ากันก่อนเติมรีเอเจนต์ใดๆ
4. สารละลายสต็อปคือสารละลายกรดซัลฟิวริก 2 M หลีกเลี่ยงการสัมผัสกับผิวหนัง
5. อย่าใช้ชุดอุปกรณ์เกินวันหมดอายุการใช้รีเอเจนต์เจือจางหรือเจือปนจากชุดอุปกรณ์จะนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในความไวและค่า OD ที่ตรวจจับได้ห้ามเปลี่ยนรีเอเจนต์จากชุดหมายเลขล็อตที่แตกต่างกันเพื่อใช้
6. การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็งใส่ไมโครเพลทที่ไม่ได้ใช้ลงในถุงปิดผนึกอัตโนมัติเพื่อปิดผนึกใหม่สารมาตรฐานและสารเติมแต่งสีที่ไม่มีสีมีความไวต่อแสง ดังนั้นจึงไม่สามารถสัมผัสกับแสงได้โดยตรง
7. ทิ้งสารละลายแต่งสีด้วยสีใดๆ ที่บ่งบอกถึงความเสื่อมของสารละลายนี้ค่าการตรวจจับ (450/630nm) ของสารละลายมาตรฐาน 0 (0 ppb) ที่น้อยกว่า 0.5((A450nm<0.5)) บ่งชี้ว่ามีการเสื่อมสภาพ
8. อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25 ℃ และอุณหภูมิสูงหรือต่ำเกินไปจะส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในความไวในการตรวจจับและค่า OD

9. วันที่จัดเก็บและวันหมดอายุ

การเก็บรักษา: เก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ ไม่แช่แข็ง
วันหมดอายุ: 12 เดือน;วันที่ผลิตอยู่บนกล่อง
หมายเหตุ: หากแพ็คเกจสูญญากาศของไมโครเพลทเกิดการรั่วซึม ยังคงใช้ได้อยู่ ไม่ส่งผลต่อผลการทดสอบ โปรดผ่อนคลายในการใช้งาน

 

 

 

 

 

 

 

Q1: เมื่อไหร่จะถูกจัดส่ง?
A1: เราจะจัดส่งสินค้าให้คุณโดยเร็วที่สุดภายใน 7 วันทำการหลังจากได้รับการชำระเงิน(กรณีปัจจัยภายนอก เช่น โรคระบาด การจัดส่งอาจล่าช้า)

 

Q2: รองรับ OEM / ODM หรือไม่?
A2: รองรับได้ แต่ปริมาณเฉพาะต้องมีมากกว่า 100,000 ชิ้น ซึ่งสะดวกสำหรับผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง

 

Q3: โรงงานของคุณมีการควบคุมคุณภาพอย่างไร?
A3: เราได้รับการรับรองระดับประเทศ ISO9001 และ ISO13485กระบวนการผลิตของเราสอดคล้องกับขั้นตอนมาตรฐานเพื่อให้มั่นใจในคุณภาพของผลิตภัณฑ์ที่เหมาะสมที่สุด

 

Q4: จะให้บริการหลังการขายอย่างไร?
A4: เราให้บริการหลังการขายทางเทคนิคออนไลน์อย่างมืออาชีพเราสามารถให้คำแนะนำแบบตัวต่อตัวผ่านวิดีโอ โทรศัพท์ ฯลฯ

 

Q5: วิธีการชำระเงินคืออะไร?
A5: เราได้รับการชำระเงินโดย T/T

 

Q6: วิธีการจัดส่ง?
A6: เลือกวิธีการจัดส่งที่ดีที่สุดสำหรับคุณโดยรับใบเสนอราคาจากผู้ให้บริการที่ร่วมมือกันหลายรายของเรา และจัดส่งตามความต้องการของคุณ